Corrección funcional por la terapia antisentido de una mutación de empalme en el gen GALT
En los últimos años, la terapia antisentido ha surgido como un enfoque terapéutico cada vez más importante para abordar varios trastornos genéticos, incluyendo los errores innatos del metabolismo.
Las mutaciones intrónicas que activan los sitios de empalme (splicing sites) son particularmente susceptibles a la terapia antisentido, ya que los sitios de empalme canónicos permanecerían intactos, manteniendo así el potencial para la restauración de empalme normal.
El análisis mutacional de los pacientes galactosémicos portugueses reveló la variación intrónica c.820 + 13 A> G como la segunda mutación más frecuente, lo que sugiere fuertemente su patogenicidad.
El objetivo de este estudio fue caracterizar funcionalmente esta variación intrónica, para dilucidar su mecanismo molecular patógeno y, en última instancia, para corregirlo por terapia antisentido.
Los ensayos de empalme utilizando un minigén en dos líneas celulares distintas y los análisis de transcripción de los pacientes mostraron que la mutación activa un sitio de empalme de donantes críptico, que induce un empalme aberrante del GALT pre-ARNm, que a su vez conduce a un desplazamiento del marco de lectura con inclusión de un codón de parada prematuro (p.D274Gfs * 17).
Los estudios funcionales-estructurales de la GALT de tipo salvaje recombinante y truncada mostraron que esta última está desprovista de actividad enzimática y propensa a la agregación.
Por último, dos oligonucleótidos de ácido nucleico cerrado, diseñado para reconocer específicamente la mutación, restauraron satisfactoriamente el empalme constitutivo o normal, estableciendo de este modo una prueba de concepto para la aplicación de la terapia antisentido como una estrategia alternativa para el tratamiento dietético claramente insuficiente en galactosemia clásica.
Functional correction by antisense therapy of a splicing mutation in the GALT gene.
Coelho AI (1), Lourenço S (1), Trabuco M (1), Silva MJ (2), Oliveira A (3), Gaspar A (4), Diogo L (5), Tavares de Almeida I (2), Vicente JB (2), Rivera I (2).
Eur J Hum Genet 2015;23 (4):500-6.
(1) Metabolism & Genetics Group, Research Institute for Medicines and Pharmaceutical Sciences (iMed.UL), Faculty of Pharmacy, University of Lisbon, Lisbon, Portugal.
(2) [1] Metabolism & Genetics Group, Research Institute for Medicines and Pharmaceutical Sciences (iMed.UL), Faculty of Pharmacy, University of Lisbon, Lisbon, Portugal [2] Department of Biochemistry and Human Biology, Faculty of Pharmacy, University of Lisbon, Lisbon, Portugal.
(3) Department of Medicine, Santa Maria Hospital, Lisbon, Portugal.
(4) Department of Pediatrics, Santa Maria Hospital, Lisbon, Portugal.
(5) Metabolic Clinics, Pediatric Hospital, CHUC, Coimbra, Portugal.
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