La expresión in vitro e in vivo de piruvato quinasa de eritrocitos humanos en células eritroides: una aproximación a la terapia génica

La deficiencia de piruvato quinasa humana (PKD), una enfermedad autosómica recesiva producida por mutaciones en el gen PKLR, es la causa más común de anemia hemolítica no esferocítica crónica.

La transducción de cDNA de piruvato quinasa eritroide (RPK tipo R) tipo salvaje en células madre hematopoyéticas con deficiencia podría ser de uso potencial como terapia de rescate en casos clínicos graves.

En este estudio, vectores gamma-retrovirales expresando RPK humana fueron diseñados como posibles candidatos de terapia génica para esta enfermedad. Mediante la reacción de pCR (reacción en cadena de la polimerasa) de forma inversa en tiempo real, Western Blot y el análisis de citometría de flujo, se demuestra la expresión RPK estable tanto en células de eritroleucemia murina indiferenciado como diferenciado.

En este ensayo in vitro, la proporción de células transducidas y la intensidad de la expresión del transgén se mantuvo constante después de 6 meses de cultivo.

Por otra parte, el transplante de células de ratón con RPK humana transducidas -Lin (-) Sca-1 en los sujetos receptores con mieloablación primarios y secundarios consiguieron que altas proporciones de los precursores eritroides y eritrocitos maduros expresaran RPK, sin inducir efectos hematopoyéticos.

Estos hallazgos sugieren que los vectores retrovirales pueden ser útiles para el suministro y la expresión de RPK en las células eritroides, y evidencian la utilización potencial de las estrategias de terapia génica de PKD eritroide para corregir el fenotipo.