Hospital Sant Joan de Déu Barcelona

Traducir

Corrección de mutantes de cistationina beta-sintasa (CBS) con chaperonas químicas: purificación y caracterización de ocho enzimas mutante para CBS.

Publicaciones científicas
21/06/2011

Las mutaciones con pérdida de sentido (missense) representan la causa más común de muchas enfermedades genéticas incluyendo la deficiencia de cistationina beta-sintasa (CBS). Muchas de estas mutaciones dan lugar a proteínas mal plegadas, que carecen de función biológica. La presencia de chaperonas químicas a veces puede aliviar o incluso restaurar el plegamiento de proteínas y la actividad de las proteínas mutantes.

Se presenta la purificación y caracterización de ocho mutantes CBS expresadas en presencia de chaperonas químicas tales como etanol, dimetilsulfóxido o trimetilamina N-óxido. La evaluación preliminar de extractos crudos de E.coli mostró que su presencia durante la expresión de la proteína tenía un impacto significativo en la cantidad de proteína CBS recuperada, la formación de tetrámeros y la actividad catalítica. Posteriormente, se purificaron ocho mutantes CBS (P49L, P78R, A114V, R125Q, E176K, P422L, I435T y S466L). Las

enzimas mutantes tetraméricas completamente saturadas con el grupo hemo mostraron igual o superior actividad específica que la CBS no mutada. Las mediciones de la estabilidad térmica demostraron que las mutantes purificadas son igualmente o más termoestables que la CBS no mutada. La respuesta a la estimulación con AdoMet o a la activación térmica varía. La falta de respuesta de R125Q y E176K a ambos estímulos indicó que sus conformaciones específicas fueron incapaces de alcanzar el estado activado. Aumento de las concentraciones de las chaperonas moleculares en extractos crudos indicaron un efecto indirecto de la sustancia química chaperona en el plegamiento de mutantes CBS.

En conclusión, las chaperonas químicas presentes en el medio de expresión fueron capaces de restablecer plenamente la actividad de los ocho mutantes de CBS, mediante la mejora del plegamiento de las proteínas. Este hallazgo podría tener implicaciones directas para el desarrollo de un enfoque terapéutico de la homocistinuria que no responde a piridoxina.

Rescue of cystathionine beta-synthase (CBS) mutants with chemical chaperones: purification and characterization of eight CBS mutant enzymes. Majtan T, Liu L, Carpenter JF, Kraus JP. University of Colorado at Denver, United States. J Biol Chem. 2010 Mar 22. [en prensa]
Última modificación: 
22/06/2011

También te puede interesar

Publicaciones científicas
21/06/2011
La deficiencia de cistationina beta-sintasa representa una forma grave de homocistinuria , que generalmente se traduce en diversos grados hiperhomocisteinemia. El síndrome de Marfan es causado por mutaciones en fibrilina-1, que es uno de los principales componentes de las microfibrillas del...
Publicaciones científicas
21/06/2011
Se revisa la evidencia de que en Dinamarca y probablemente algunos otros países europeos el número de personas identificadas con homocistinuria debido a homocigosis para la mutación común c.833T> C (p.I278T) en el gen que codifica la cistationina beta-sintasa (CBS)...
Publicaciones científicas
21/06/2011
La homocistinuria clásica es causada a la deficiencia de cistationina beta-sintasa (CBS). Se han descrito más de 130 mutaciones , que difieren en prevalencia y gravedad, en el gen de la CBS. La mutación p.I278T es muy frecuente, se ha encontrado en todos los países...